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植物基因工程实验技术指南 ![]()
以植物基因工程操作程序为主线,逐渐展开叙述每一个实验的原理、操作技术及结果分析,同时介绍每一个实验的多种方案及其设计原则,以利于实验者选择和自我设计实验方案,拓宽其思路,激励实验者的创新能力。全书注重科学性和可操作性,紧密联系实际,学以致用,要求内容正确、系统、全面,形成完整的实验技术体系,突出植物特点,减少与其它学科的书重复。
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目录
前言 第一篇 核酸分离提取技术 第1章 微生物DNA提取技术2 实验1-1大肠杆菌质粒DNA提取2 1-1-1质粒DNA小量常规提取法2 1-1-2质粒DNA小量试剂盒提取法3 1-1-3质粒DNA大量提取法5 实验1-2农杆菌Ti质粒DNA提取7 实验1-3农杆菌双元载体中mini-Ti质粒提取7 实验1-4M13噬菌体DNA提取9 1-4-1M13噬菌体单链DNA提取9 1-4-2M13噬菌体RF DNA提取9 第2章植物DNA提取10 实验2-1植物细胞总DNA提取10 2-1-1可用于PCR的DNA微量制备10 2-1-2SDS法10 2-1-3CTAB法11 2-1-4高盐法提取多糖类植物总DNA11 2-1-5食用油中提取DNA的方法12 实验2-2植物核DNA提取13 2-2-1核DNA的大量提取法13 2-2-2核DNA微量提取法14 2-2-3核DNA柱式抽提试剂盒法15 2-2-4核DNA磁珠法抽提试剂盒法15 实验2-3植物叶绿体DNA提取17 2-3-1密度梯度离心DNase处理法17 2-3-2高盐低pH方法提取叶绿体DNA18 2-3-3多糖类植物叶绿体DNA分离提取19 实验2-4植物线粒体DNA提取纯化20 第3章植物RNA提取技术22 实验3-1植物总RNA提取22 3-1-1异硫氰酸胍法22 3-1-2苯酚法22 3-1-3LiCl沉淀法23 3-1-4一步提取法23 3-1-5植物总RNA提取纯化试剂盒法23 3-1-6Fruit-mateTM for RNA purification法24 3-1-7RNAiso for polysaccharide-rich plant tissue法25 3-1-8TRIzol法26 实验 3-2总RNA中mRNA的分离提取27 3-2-1层析法27 3-2-2poly(A) mRNA 提取纯化试剂盒法27 3-2-3MagnosphereTM UltraPure mRNA purification Kit法28 实验3-3植物microRNA的提取分离29 3-3-1microRNA提取试剂盒法29 3-3-2miRcute miRNA 提取分离试剂盒法30 第4章核酸提取物纯度、浓度及定量检测32 实验4-1细菌DNA提取物纯度及浓度检测32 4-1-1分光光度(紫外吸收)法32 4-1-2琼脂糖凝胶电泳法32 实验4-2植物DNA提取物纯度及浓度检测33 4-2-1分光光度(紫外吸收)法33 4-2-2琼脂糖凝胶电泳法33 4-2-3荧光光谱法33 实验4-3植物RNA提取物纯度及浓度检测34 4-3-1分光光度(紫外吸收)法34 4-3-2琼脂糖凝胶电泳法34 第一篇主要参考文献36 第二篇基因分离克隆技术 第5章目的基因的PCR扩增技术38 实验5-1cDNA合成38 5-1-1AMV法38 5-1-2M-MLV法38 5-1-3第一链cDNA合成试剂盒法39 实验5-2基因保守序列的PCR扩增40 5-2-1一般的PCR方法40 5-2-2PCR酶试剂盒法40 5-2-3PCR反应要素41 5-2-4PCR反应条件:温度、时间和循环次数42 5-2-5常用PCR反应试剂盒43 实验5-3反转录PCR (RT-PCR) 扩增技术44 5-3-1植物总RNA提取44 5-3-2反转录PCR (RT-PCR) 扩增44 5-3-3一步法反转录PCR(RT-PCR)试剂盒法45 实验5-4PCR扩增产物的克隆46 5-4-1平末端连接46 5-4-2TA克隆52 实验5-5反向PCR(Reverse-PCR)55 实验5-6实时荧光定量PCR55 5-6-1样品RNA的抽提55 5-6-2RNA质量检测56 5-6-3样品cDNA合成56 5-6-4梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因(β-actin)实时定量PCR56 5-6-5制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板57 5-6-6待测样品的待测基因实时定量PCR57 5-6-7实时定量PCR引物57 5-6-8电泳57 5-6-9实时荧光定量PCR试剂盒法57 实验5-7cDNA末端快速扩增技术(RACE)59 5-7-1总RNA的提取59 5-7-2反转录PCR59 5-7-3RACE方法扩增3′端59 5-7-4RACE方法扩增5′端60 第6章基因芯片技术分离目的基因63 实验6-1制备芯片63 6-1-1基片的制备63 6-1-2点样探针的制备64 6-1-3基因芯片点样64 实验6-2样品制备65 6-2-1植物RNA提取65 6-2-2检测提取的RNA65 6-2-3纯化总RNA(Qiagen的RNeasy Mini Kit或Micro Kit)65 6-2-4纯化总RNA的定量检测65 6-2-5cDNA合成65 6-2-6纯化cDNA(Affymetrix GeneChip Sample Cleanup Module)66 6-2-7cRNA合成和纯化(GeneChip IVT Labeling Kit)66 6-2-8纯化cRNA的定量检测67 6-2-9片段化cRNA67 实验6-3芯片杂交67 实验6-4芯片图像处理68 实验6-5芯片数据预处理69 实验6-6芯片差异表达基因分析69 实验6-7全基因克隆69 第7章插入突变分离克隆目的基因71 实验7-1T-DNA标签法71 7-1-1T-DNA载体的构建71 7-1-2对转化后代进行表型分析71 7-1-3对突变体进行遗传分析71 7-1-4PCR法分离T-DNA插入位点的侧翼序列71 7-1-5证实T-DNA的插入导致表型的变异71 实验7-2转座子标签法71 7-2-1农杆菌介导法把转座子导入目标生物体72 7-2-2转座子的初步定位72 7-2-3转座子插入突变的鉴定及分离72 7-2-4转座子在目标生物体内的活动性能检测72 7-2-5分离克隆目的基因72 实验7-3sAc/Ds双系统法72 7-3-1sAc的转化植株和Ds的转化植株的获得72 7-3-2转化株杂交,挑选杂合sAc和Ds的子一代植株73 7-3-3Ds在sAc产生的转位酶帮助下转座,产生表型突变株73 7-3-4建立对应于变异株的基因文库或cDNA文库73 7-3-5筛选对应的基因克隆并了解该基因的特征73 7-3-6回复突变株的获得73 第8章图位克隆目的基因74 实验8-1构建遗传作图群体74 实验8-2筛选连锁分子标记74 实验8-3突变基因的染色体初步定位75 实验8-4基因精细定位75 实验8-5构建基因组文库76 实验8-6利用分子标记筛选基因组文库76 实验8-7PCR扩增测序寻找突变位点76 实验8-8基因组高通量测序寻找突变位点76 实验8-9验证克隆基因的正确性77 第9章基因文库技术分离目的基因78 实验9-1cDNA 文库构建78 实验9-2BAC 文库构建80 实验9-3YAC文库构建85 实验9-4TAC文库构建89 第10章差异表达基因的分离技术92 实验10-1差别杂交与扣除杂交92 10-1-1原代目的基因培养92 10-1-2总RNA提取92 10-1-3层析法分离提纯目的基因92 10-1-4制取cDNA探针92 10-1-5cDNA扣除文库的构建92 10-1-6cDNA扣除文库的扩增及初步鉴定94 实验10-2mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)94 10-2-1总RNA提取94 10-2-2RNA样品中微量DNA的去除94 10-2-3建立反转录归类反应体系95 10-2-4PCR选择扩增95 10-2-5差别条带的回收95 10-2-6回收条带的PCR扩增95 10-2-7扩增产物的纯化96 实验10-3代表性差异(RAD)和抑制性扣除杂交(SSH)96 10-3-1总RNA提取96 10-3-2磁性球珠分离mRNA96 10-3-3抑制消减杂交文库的构建96 10-3-4载体的连接及转化98 10-3-5插入片段长度的蓝白斑筛选与鉴定98 10-3-6菌体的培养与保存99 10-3-7序列分析和序列提交99 实验10-4交互扣除RNA 差别显示技术(RSDD)99 10-4-1扣除杂交99 10-4-2差异显示99 10-4-3表达分析100 实验10-5随机引物PCR的RNA指纹法100 10-5-1RNA的提取和制备100 10-5-2总RNA的DNase处理100 10-5-3反转录及PCR扩增100 10-5-4差异片段回收及克隆测序101 第11章功能蛋白组技术分离目的基因102 实验11-1用于双向电泳分析的植物总蛋白提取及浓度测定102 11-1-1酚法提取植物总蛋白102 11-1-2三氯乙酸沉淀法提取植物总蛋白103 11-1-3植物总蛋白提取试剂盒法103 11-1-4Bradford法测定蛋白质浓度105 11-1-5蛋白质浓度测定试剂盒法105 实验11-2双向电泳分离目的蛋白109 11-2-1IPG胶条的水合和等电聚焦109 11-2-2IPG胶条的平衡111 11-2-3SDS-PAGE电泳111 实验11-3双向电泳凝胶染色111 11-3-1考马斯亮蓝染色法111 11-3-2SYPRO Ruby染色法112 11-3-3硝酸银(AgNO3)染色法112 11-3-4考马斯亮蓝蛋白质染色试剂盒法113 实验11-4用于质谱分析的多肽样品制备113 第12章酵母双杂交系统分离克隆目的基因116 实验12-1双杂交文库构建及筛选116 实验12-2酵母双杂交文库筛选目的基因117 12-2-1通过酵母配对来筛选目的基因117 12-2-2通过共转化的方法筛选目的基因119 实验12-3分析阳性相互作用120 12-3-1营养缺陷型/报告基因表达/3AT方法重测表型120 12-3-2酵母双杂交相互作用基因的最终获得121 第二篇主要参考文献123 第三篇DNA重组及载体构建技术 第13章目的基因克隆载体构建126 实验13-1目的基因PCR扩增126 实验13-2目的基因插入T载体126 实验13-3目的基因与克隆载体的限制性酶切及回收127 13-3-1平末端的限制性内切核酸酶单酶切127 13-3-2黏性末端的限制性内切核酸酶单酶切128 13-3-3限制性内切核酸酶双酶切128 13-3-4试剂盒法回收酶切产物129 13-3-5采用乙醇沉淀法进行酶切产物的回收130 实验13-4目的基因与克隆载体的连接反应130 实验13-5连接产物转化大肠杆菌感受态细胞131 13-5-1化学法转化大肠杆菌感受态细胞131 13-5-2电击法转化大肠杆菌感受态细胞132 实验13-6目的基因重组克隆载体的鉴定132 13-6-1重组克隆载体的PCR鉴定132 13-6-2重组克隆载体的酶切鉴定133 13-6-3菌落原位杂交鉴定重组克隆载体133 13-6-4α-互补实验鉴定重组克隆载体136 13-6-5插入失活鉴定重组菌落137 第14章目的基因遗传转化载体构建138 实验14-1一元转化系统的中间表达载体的构建138 14-1-1共整合载体系统的中间表达载体构建138 14-1-2拼接末端载体系统的中间表达载体构建139 实验14-2一元载体系统的中间表达载体导入农杆菌139 14-2-1平板涂布法140 14-2-2纤维素膜固定法141 实验14-3二元转化系统的中间表达载体构建141 实验14-4二元载体系统的中间表达载体导入农杆菌142 14-4-1三亲本杂交法转化农杆菌143 14-4-2冻融法直接转化农杆菌 143 14-4-3电转化法直接转化农杆菌144 第15章其他遗传转化载体构建146 实验15-1发根农杆菌Ri遗传转化载体构建146 实验15-2病毒表达载体构建147 实验15-3Tag融合表达的遗传转化载体构建148 15-3-1直接构建Tag融合表达的遗传转化载体148 15-3-2通过中间载体构建Tag融合表达的遗传转化载体149 实验15-4多基因遗传转化表达载体构建150 15-4-1融合基因表达法构建多基因表达载体151 15-4-2利用普通限制性酶构建多基因独立表达载体152 15-4-3利用同尾酶构建多基因独立表达载体154 第16章组织特异表达载体构建158 实验16-1组织特异性启动子与质粒DNA的酶切及回收158 实验16-2组织特异性启动子与载体DNA的连接158 实验16-3根特异性表达载体构建159 实验16-4种子特异性表达载体构建160 第17章DNA重组及特异载体构建新技术161 实验17-1DNA重组新技术161 17-1-1重组融合PCR法161 17-1-2USER酶克隆技术162 17-1-3辅助交配遗传整合型克隆163 17-1-4无缝克隆技术163 17-1-5TALE技术165 17-1-6Gateway技术166 17-1-7TOPO克隆技术167 实验17-2特异载体构建新技术168 17-2-1DNA共转化及表达载体的正负向选择克隆载体构建168 17-2-2转座子表达载体构建168 17-2-3不依赖基因序列和连接反应的克隆载体构建169 17-2-4目的基因定位整合表达载体构建170 第三篇主要参考文献172 第四篇目的基因遗传转化技术 第18章根癌农杆菌Ti质粒介导转化目的基因174 实验18-1整体植株及组织器官接种根癌农杆菌诱发冠瘿瘤174 18-1-1开放性整体植株诱发冠瘿瘤174 18-1-2无菌整体植株诱发冠瘿瘤174 18-1-3无菌外植体诱发冠瘿瘤174 实验18-2冠瘿瘤的离体培养及植株再生175 实验18-3农杆菌叶盘法转化175 18-3-1农杆菌培养基菌液直接侵染法175 18-3-2植物组织培养基菌液间接侵染法176 18-3-3cpti基因叶盘法转化甘蓝176 实验18-4植物悬浮细胞与农杆菌共培养转化177 实验18-5植物原生质体与农杆菌共培养转化178 第19章发根农杆菌Ri及病毒质粒介导转化目的基因180 实验19-1发根农杆菌整体植株接种及离体器官共培养诱发毛状根180 实验19-2毛状根的离体培养及植株再生180 实验19-3发根农杆菌介导的目的基因转化181 实验19-4病毒介导外源基因转化182 19-4-1病毒接种法182 19-4-2农感染型质粒介导法(agroinfection)182 第20章直接导入法转化目的基因183 实验20-1基因枪转化外源基因183 实验20-2PEG介导基因转化184 实验20-3电激诱导基因转化185 实验20-4显微注射导入外源基因186 实验20-5激光转化外源基因186 实验20-6超声波转化外源基因187 20-6-1烟草叶片超声波转化187 20-6-2玉米幼胚愈伤组织超声波转化188 实验20-7脂质体转化外源基因188 20-7-1自制转化脂法189 20-7-2使用商品转化脂方法189 第21章种质系统介导转化目的基因191 实验21-1花粉粒媒体介导外源基因转化191 21-1-1花粉粒与DNA混合授粉法191 21-1-2花粉培养法191 21-1-3柱头切除法191 21-1-4花粉粒转化法191 实验21-2子房注射导入外源基因192 实验21-3穗鞘腔浸泡导入外源基因192 实验21-4种子浸泡导入外源基因192 第22章遗传转化新技术194 实验22-1叶绿体基因转化194 实验22-2基因敲除转化195 22-2-1RNA干扰转化195 22-2-2siRNA的设计及转染真核细胞199 实验22-3基因编辑及其遗传转化技术201 22-3-1基因组定点编辑技术概述201 22-3-2CRISPR/Cas系统的作用机制202 22-3-3CRISPR/Cas系统的类型及其特性202 22-3-4CRISPR/Cas系统的基本操作程序203 22-3-5CRISPR/Cas系统的功能及其应用204 22-3-6CRISPR/Cas的遗传转化系统及其实验205 第四篇主要参考文献217 第五篇转基因植物的检测鉴定 第23章标记基因及报告基因表达检测220 实验 23-1冠瘿碱检测220 23-1-1胭脂碱、章鱼碱检测220 23-1-2农杆碱、甘露碱检测221 实验23-2 NPT-Ⅱ活性检测221 23-2-1点渍法222 23-2-2纸层析法223 23-2-3非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法223 实验23-3GUS活性检测224 23-3-1组织化学染色法225 23-3-2荧光测定法225 23-3-3比色测定法228 实验23-4 Cat活性检测228 23-4-1DTNB比色法228 23-4-2薄层层析法229 23-4-3试剂盒法230 实验23-5Pat 活性检测231 23-5-1DTNB比色法231 23-5-2薄层层析法232 实验23-6Dhfr活性检测232 实验23-7萤光素酶活性检测232 23-7-1光自显影定性检测233 23-7-2光分析定量检测233 第24章外源基因整合及其特性的检测鉴定235 实验24-1转基因植物的Southern杂交检测235 24-1-1用作探针的核酸片段的制备235 24-1-232P同位素标记探针的制备、纯化及效率检测235 24-1-3生物素标记探针的制备、纯化及效率检测238 24-1-4地高辛标记探针的制备、纯化及效率检测239 24-1-5植物基因组DNA的大量提取及纯化240 24-1-6植物基因组DNA 的限制性酶切及纯化241 24-1-7酶切产物的电泳及转移用膜和凝胶的准备241 24-1-8转膜及固定242 24-1-9探针杂交及信号检测242 实验24-2外源基因整合的PCR-Southern杂交检测243 实验24-3外源基因整合的拷贝数检测243 24-3-1利用Southern blot检测转基因植物中外源基因的拷贝数243 24-3-2利用real-time PCR检测转基因植物中外源基因的拷贝数244 24-3-3利用原位杂交检测转基因植物中外源基因的拷贝数245 实验24-4外源基因整合位点检测246 24-4-1反向PCR检测外源基因整合位点246 24-4-2交错式热不对称PCR检测外源基因整合位点247 第25章外源基因表达的检测鉴定 249 实验25-1外源基因表达的Northern杂交检测249 25-1-1植物总RNA提取249 25-1-2杂交探针制备249 25-1-3Northern杂交250 实验25-2外源基因表达的RT-PCR检测251 实验25-3外源基因表达的mRNA原位杂交251 实验25-4外源基因表达的ELISA检测253 实验25-5外源基因表达的Western杂交检测254 第26章转基因植物检测新技术256 实验26-1生物传感器256 26-1-1表面等离子共振生物传感器256 26-1-2压电式晶体管生物传感器258 26-1-3电化学发光PCR方法260 实验26-2侧向流动型免疫检测261 实验26-3转基因植物表达产物色谱检测263 实验26-4转基因植物毛细管电泳检测263 第五篇主要参考文献265 第六篇转基因植物的生物学特性及表观遗传学检测 第27章转基因植物的遗传特性检测268 实验27-1转基因植物的(非)孟德尔遗传规律检测268 实验27-2转基因植物的纯(嵌)合性检测268 实验27-3转基因植物的遗传稳定性检测269 第28章转基因植物目的性状检测及其生理生化指标分析271 实验28-1转基因植物目的性状及其变异检测271 28-1-1转基因植物目的性状检测271 28-1-2转基因植物变异性状检测272 实验28-2抗逆转基因植物目的性状的生理指标分析273 28-2-1叶片相对含水量(RWC)测定273 28-2-2叶片相对电导率测定274 28-2-3叶绿素含量测定274 28-2-4净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)及水分利用效率测定(WUE)274 实验28-3抗逆转基因植物生化指标检测与分析275 28-3-1可溶性蛋白含量测定275 28-3-2游离脯氨酸含量测定276 28-3-3脱落酸(ABA)含量测定276 28-3-4丙二醛(MDA)含量测定277 28-3-5植物逆境保护酶(SOD、CAT、POD)活性测定278 实验28-4抗逆转基因植物目标性状鉴定与评价280 28-4-1转基因植物的抗旱性鉴定280 28-4-2转基因植物的耐盐性鉴定281 28-4-3转基因植物耐寒性鉴定282 28-4-4转基因植物耐热性鉴定284 第29章转基因植物的遗传多样性检测285 实验29-1转基因植物的RFLP检测285 实验29-2转基因植物的RAPD检测286 实验29-3转基因植物的SSR检测287 第30章转基因植物的表观遗传学检测289 实验30-1转基因植物染色质的免疫沉淀实验289 实验30-2转基因植物的甲基化敏感扩增多态性(MSAP)290 实验30-3转基因植物DNA甲基化改变的变性梯度胶电泳检测291 第六篇主要参考文献293 第七篇生物信息学技术在植物基因工程中的应用 第31章基因分离克隆中的生物信息学技术296 实验31-1基因PCR引物设计及评价296 实验31-2基因电子克隆中的BLAST比对搜索299 实验31-3基因电子延伸中的序列拼接组装303 31-3-1使用CAP3进行序列拼接组装303 31-3-2使用DNAMAN进行序列拼接组装303 第32章基因结构和功能分析中的生物信息学技术307 实验32-1基因多序列比对分析307 实验32-2基因的分子进化分析307 实验32-3基因的完整性分析310 实验32-4基因中motif的识别与分析313 第33章基因表达分析中的生物信息学技术316 实验33-1基因表达仓库(GEO)中数据的获得316 实验33-2差异表达基因的筛选316 实验33-3差异表达基因的聚类分析321 第34章蛋白质结构功能分析中的生物信息学技术324 实验34-1蛋白质结构与功能数据库检索324 实验34-2蛋白质二级结构预测325 实验34-3蛋白质三级结构预测327 第七篇主要参考文献330 第八篇转基因植物的安全性评价检测 第35章转基因植物的环境安全性评价332 实验35-1转基因植物的生存竞争性实验332 实验35-2转基因植物的杂草性实验332 实验35-3转基因植物对靶标生物的影响333 实验35-4转基因植物基因飘流检测334 第36章转基因植物对土壤微生物群落的影响335 实验36-1转基因植物对根圈细菌种群生态的影响335 36-1-1稀释平板计数法335 36-1-2Biolog ECO 平板法335 实验36-2转基因植物对土壤微生物群落多样性的影响336 实验36-3转基因植物外源基因在土壤微生物中漂移检测337 第37章转基因植物的营养学及过敏性检测338 实验37-1转基因植物的营养学检测338 37-1-1转基因大豆油成分分析检测338 37-1-2转基因玉米胰蛋白酶抑制剂抗营养因子的安全性分析339 实验37-2转基因植物表达蛋白的模拟胃肠道消化检测340 实验37-3转基因植物中外源蛋白的过敏性分析343 第38章转基因植物的毒理学检测345 实验38-1转基因植物的急性毒性试验345 实验38-2转基因植物的慢性毒性试验345 实验38-3转基因植物的细胞毒性试验347 第八篇主要参考文献348 中英文名词缩写对照349 附录 附录1主要溶液及缓冲液的配制352 1-1质粒提取试剂352 1-2DNA提取溶液352 1-3电泳溶液352 1-4酵母转化试剂352 1-5分子杂交试剂352 1-6蛋白质电泳试剂353 1-7磷酸盐缓冲液353 1-8Tris-HCl缓冲液354 附录2常用培养基的配制354 2-1大肠杆菌LB培养基354 2-2蓝白斑筛选培养基354 2-3酵母YPD培养基354 2-4酵母SC-U基本培养基354 2-5酵母SC-U诱导培养基354 2-6农杆菌培养基354 附录3常用抗生素的配制及使用浓度355 3-1卡那霉素355 3-2氨苄西林355 3-3潮霉素355 3-4头孢菌素类355 附录4常用相对分子质量标准355 附录5常用的测量单位及摩尔数与重量间的换算356 5-1常用的测量单位356 5-2摩尔数与重量间的换算356 附录6DNA片段分子质量及其量与质量的换算356 附录7凝胶浓度的有效分离范围357 7-1不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围357 7-2不同浓度SDS-PAGE胶的分离范围357 附录8转基因植物主要目的基因、表达蛋白和目的性状357 8-1目的性状为抗病菌类基因357 8-2目的性状为抗虫类基因357 8-3目的性状为抗除草剂类基因357 8-4目的性状为品质改良类基因357 8-5目的性状为抗旱类基因358 8-6目的性状为抗盐碱类基因358 8-7目的性状为抗低温类基因358 8-8目的性状为养分高效利用类基因358 8-9目的性状为次生代谢类基因358 8-10目的性状为生物反应器类基因358 8-11目的性状为雄性不育类基因358 8-12目的性状为筛选类基因358 附录9植物基因组大小及拷贝数计算方法358 9-1基因DNA定量测定358 9-2常见植物的基因组大小和质量358 附录10我国转基因生物安全管理法规360 10-1我国转基因生物安全管理机构360 10-2我国转基因生物安全管理法规360 附录11植物基因工程实验守则360 附录12植物基因工程实验报告的基本内容和要求361
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